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GE公司Quantitative Western blotting在线讲座
2011年12月06日 讲座课堂 暂无评论 ⁄ 被围观 6,666+


讲座题目:Quantitative Western blotting - Webinar
讲座人:Maria Winkvist Ph.D
GE Healthcare Bio-sciences AB
Uppsala, Sweden

Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。

Western Blot与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Western Blot显色的方法主要有以下几种:
放射自显影
底物化学发光ECL
底物荧光ECF
底物DAB呈色
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。

自从1990年GE的ECL进入市场以来,增强化学发光(ECL)蛋白印记系统产品库不断丰富,以适应从常规蛋白检测到采用基于荧光Amersham ECL™ plex进行多道分析的各种应用。通过选择ECL检测系统,研究人员不仅可以避开对人有危害的放射性同位素操作,同时还拥有了另外的分析工具,正是由于这种分析具有一次性的特点,使得蛋白分析比以前变得更加快速,更加敏感,也更加地灵活。

Amersham ECL家族最近加入的成员是ECL prime,它至少具有ECL plus两倍的敏感性,其最低检测限(LOD)可达低皮克量级。该试剂的特点在于大幅增加了信号的稳定性,这使得反复曝光变成可能,并使其能在一个试验中轻松地进行多个印记处理。此外,ECL prime所发射的信号强度提高了3到5倍,这也就意味着ECL prime也采用比ECL plus低3倍的一抗和二抗进行检测,这不仅降低了背景,并使抗体试剂的费用得到降低。

Learn about the development of refined detection methods and reagents which have opened up the possibility to use the Western blotting technique in quantitative analysis, for accurate monitoring of small changes in protein abundance and for detection of posttranslational modifications using chemiluminescent detection.
Here we demonstrate that ECL™ Prime with high sensitivity and broad dynamic range, strong signal intensity and stability used in combination with ImageQuant™ LAS 4000 fulfils all the criteria needed for quantitative analysis and is a highly convenient way of reaching quantitative western blotting data. In addition you will learn more about fluorescent Western blotting, ECL Plex™ and what that could bring in to your research.

更多信息请登录GE官方网站查看:http://www.gelifesciences.com/eclprime



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