前言
X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂，已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染，且细胞毒性低，转染后无需更换培养基。
降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的：
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本研究中，在Hela细胞上进行了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HPTransfection Reagent的细胞毒性和转染效率检测，并与其他试剂进行了比较。
步骤
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结果
细胞毒性
■ 图 1 ）。而其他试剂在转染5个小时后，细胞指数值有明显的下降，表明存在细胞毒性。
图1: 使用X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent及其争转染试剂在Hela细胞上转染GFP表达质粒后，xCELLigence 检测的细胞指数变化曲线图。
图2：Hela细胞转染后的形态。可见光图像由Cellavist仪器获得（10倍放大）
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图3：比较罗氏X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP 与其试剂转染细胞后，细胞活力的百分比。WST-1试剂盒检测得出数值，并以X-tremeGENE 9组结果进行标准化。
转染效率
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图4 ：X-tremeGENE Transfection Reagent转染的细胞表达大量GFP。转染48h后，Cellavista记录的细胞表达GFP的荧光图像（10倍放大）。
图5：GFP表达水平定量。Cellavista分析软件统计转染后24h、48h和72h后的转染效率百分数（以X-tremeGENE 9 Transfection Reagent转染24h后获得的值进行标准化）。
总结
X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent在Hela细胞系的检测实验上，表现出低细胞毒性和高DNA转染效率。xCELLigence RTCA MP也是理想的适合实时检测试剂特异性效应的仪器。
材料和方法
细胞培养
Hela细胞（ATCC）接种在合适的含附加成分的细胞培养基中，并在37℃，5%CO2 湿润环境下培养。细胞用胰蛋白酶消化、清洗并接种在E-Plate VIEW 96上。
转染
接种24小时后，分别用三种转染试剂X-tremeGENE 9、X-tremeGENE HP以及其他试剂（LTX和L2K），转染CMV启动子的GFP-pcDNA3.1质粒。转染根据指导手册说明，采用各说明书建议的最适DNA与转染试剂比例。所有实验重复三次。
实时细胞分析
xCELLigence RTCA MP仪器连续监测实验全程细胞状态（从细胞接种到转染后三天）。测定每孔50 μl 细胞培养基的值作为背景电阻抗。每孔最终体积调整至100 μl，密度为4000个Hela细胞。接种后，电阻抗以固定时间间隔被测定。细胞指数（CI）值以转染时进行标准化。
自动成像
Cellavista系统高通量显微镜可在实验过程中指定时间点进行操作。xCELLigence 系统测定可短暂暂停，E-Plate VIEW 96可转化进Cellavista系统中。通过10倍物镜可获得所有96孔板的可见光和荧光图像。转染效率可使用Cellavista软件分析获得。获取图像后，E-Plate VIEW 96返回xCELLigence RTCA MP仪器中，细胞电阻测定可重新开始。
WST-1 分析
细胞活性可使用WST-1细胞增殖试剂盒(罗氏应用科学)在实验终点测定（转染后72小时），参见操作说明。
订货信息
英文原文下载：
Real-time monitoring of low cytotoxic X-tremeGENE DNA Transfection Reagents using the xCELLigence System
X-tremeGENE DNA Transfection Reagents are nonliposomal,multicomponent reagents proven to efficiently transfect a broad spectrum of cell types. X-tremeGENE 9 and X-tremeGENE HP Reagents can be used in the presence or absence of serum and have low cytotoxic effects,eliminating the need to change medium after transfection.Minimal side effects of the transfection reagent itself are important: to achieve a high expression rate over a long time to reduce the number of dead cells and released proteases, and overexpress higher levels of undigested recombinant protein to obtain physiologically relevant results
