概述 Spallanzani（1776）最早发表了冷“处理”对“细胞”生命活动影响的报道，他用雪冷冻玻璃瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，发现了一个令人惊奇的现象，那些原本已经不动了的精子又“复活”了，就好象是刚从输精管排出来的一样，冷处理延长至数十分钟，情况依然如此。于是，他认为冷不能杀死精子。大约100年以后，许多早期的学者重复了低温处理对精子活动的影响，同样得出了相似的结论。到1900年前后，科学家基本上肯定了生物成分（如精子和一些生物化学物质）能够在零下温度贮存的事实。 Shettles...

无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培...

一、血清灭活问题。 1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？ 答：不是必须的，看做什么实验了。 2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？ 答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。 3、问：我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？ 答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，最好还是灭活一下再用较安全。 4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活...

一、玻璃器皿的清洗 在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。 1、新购的玻璃器皿 除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于1~2%的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒...

1.建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。 2.其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。 3.根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 4.用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。 表 不同细胞系适用的培养基 细胞系 细胞类型 种 组 织 培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM, 10%...

一、培养基的历史 体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞...

细胞培养基本条件 1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养 基（SFM）。 2.为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中...

1.细胞培养实验室常见问题1 A. 血清问题 B. 培养基 2.血清的分类 类别 动物年龄 胎牛血清 (FBS) 胎儿 新生牛血清（NCS） 出生10日内 小牛血清BCS 16 – 22 周 供体牛血清 成年牛 3.沉淀 血清问题 •你卖的血清是不是污染了，我看见里面有微生物了！ •我看见血清里有大片沉淀，这个现象正常吗? •我把你的血清培养了，发现有细菌生长，我要退货！ 4.关于沉淀的解答 •说明1: 血清非人工产品，有些东西沉淀出来系自然现象 –纤维蛋白原 –盐析出。如磷酸钙等 –胆固醇和脂肪酸 –蛋白析出 5.关于沉淀的解答 6...

Wave细胞培养手册原理和方法 WAVE Bioreactor Systems – Cell culture procedures WAVE Bioreactor摇袋式细胞培养生物反应器是一种专利产品。其研发始于1996年，并且在1998年投入商品化生产。目前在世界各地有数百台在使用中。WAVE Bioreactor摇袋式细胞培养生物反应器适用于各种类型的细胞培养，包括CHO、NSO、杂交瘤、HEK293、昆虫细胞/baculovirus杆状病毒、腺病毒、T细胞、植物细胞和初级人类细胞株。 在这个装置中，细胞及培养被置于一个预先消过毒的无菌塑料袋中，这种塑料袋也被称之为Cellbags生...